Plasmide Double Nickase (h) 5-LO: sc-401239-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 5-LO correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 5-LO Double Nickase (h) et le plasmide 5-LO Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ALOX5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 5-LO Antibody (33): sc-136195
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 5-LO | sc-401239-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 5-LO | sc-401239-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ALOX5 humain code la 5‑lipoxygénase (5‑LO), une dioxygénase à fer non hémique qui catalyse la conversion de l’acide arachidonique en 5‑HPETE et en leucotriène A4, initiant ainsi la biosynthèse des leucotriènes. L’activité de la 5‑LO s’intègre à celle de la leucotriène C4 synthase et à la signalisation des récepteurs en aval pour réguler le tonus inflammatoire, la chimiotaxie des leucocytes, la perméabilité vasculaire et les réponses du muscle lisse bronchique. L’enzyme est contrôlée par une translocation membranaire dépendante du calcium et par des interactions avec FLAP, reliant la production de médiateurs lipidiques à l’état d’activation cellulaire. Une dérégulation de la signalisation ALOX5/5‑LO a été associée à l’asthme et à l’inflammation allergique, à l’athérosclérose et à des microenvironnements tumoraux inflammatoires, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude des pathologies dues aux eicosanoïdes.
5-LO Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALOX5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALOX5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALOX5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALOX5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.