Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
5-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401239
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- 5-LO O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico 5-LO, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:5-LO Anticorpo (33): sc-136195
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
5-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401239 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
ALOX5 codifica a 5-lipoxigenase (5-LO), uma dioxigenase de ferro não heme que catalisa as primeiras etapas comprometidas do metabolismo do ácido araquidônico até o leucotrieno A4, que posteriormente é convertido em leucotrienos bioativos. A atividade da 5-LO é regulada pelo fluxo de cálcio celular, pela associação à membrana com a FLAP (ALOX5AP), por sinalização dependente de fosforilação e pelo estado redox, conectando-a à ativação da imunidade inata e às redes de mediadores lipídicos inflamatórios. A sinalização de leucotrienos por meio dos receptores CysLT e BLT molda a quimiotaxia de leucócitos, a permeabilidade vascular e a liberação de citocinas, inserindo a ALOX5 em vias relevantes para asma e inflamação alérgica, aterosclerose e inflamação associada a tumores. A expressão desregulada de ALOX5 ou o fluxo da via também é usada como leitura mecanística em estudos de estresse oxidativo, polarização de macrófagos e interação cruzada de eicosanoides com prostanoides derivados da ciclooxigenase.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO 5-LO (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ALOX5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ALOX5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ALOX5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína 5-LO.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ALOX5 para a investigação da sinalização de 5-LO, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ALOX5 críticos para a função 5-LO
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ALOX5 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo 5-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo 5-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ALOX5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo 5-LO Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR 5-LO (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ALOX5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ALOX5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.