Plasmide CRISPR d'Activation (h) 5α-Reductase 2: sc-402353-ACT

SRD5A2 code la 5α‑réductase 2 humaine, une oxydoréductase dépendante du NADPH qui convertit la testostérone en dihydrotestostérone (DHT), un androgène plus puissant, modulant ainsi la signalisation du récepteur des androgènes dans les tissus sensibles aux androgènes. Cette étape enzymatique est au cœur du métabolisme des hormones stéroïdiennes et influence les programmes transcriptionnels qui régissent la différenciation sexuelle, l’homéostasie épithéliale et la biologie de la reproduction. Une activité altérée de SRD5A2 a été associée à des troubles du métabolisme des androgènes et du développement génital, et une signalisation androgénique dérégulée est pertinente pour la biologie de la prostate et le remodelage tissulaire dépendant des hormones. Par conséquent, SRD5A2 est largement étudié dans le cadre de la régulation endocrinienne, du flux des voies stéroïdogènes et des phénotypes cellulaires dépendants des androgènes.

5α-Reductase 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SRD5A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

5α-Reductase 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SRD5A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SRD5A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 5α-Reductase 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SRD5A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 5α-Reductase 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 5α-Reductase 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SRD5A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.