Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Partículas Lentivirales de Activación (m) 4E-BP1: sc-420149-LAC
- Especies Diana: mouse
- 200 µl de Partículas Lentivirales de Activación CRISPR/dCas listas para usar
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) 4E-BP1 es un sistema de activación de la trascripción por mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen determinado a través de la tranducción lentiviral de las células
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) 4E-BP1 incluyen los siguientes elementos activadores SAM: plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada, (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y un plásmido que codifica la secuencia de diana específica de 20 nt de ARN. También contienen genes de resistencia a blasticidina, higromicina y puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación génica
- Los gRNA codificados por el 4E-BP1 Plásmido de activación lentiviral (m) y el 4E-BP1 Plásmido de activación lentiviral (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas del promotor Eif4ebp1. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia de la activación génica puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: 4E-BP1 Anticuerpo (P-1): sc-9977
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Partículas Lentivirales de Activación (m) 4E-BP1 | sc-420149-LAC | 200 µl | $455.00 |
El gen murino Eif4ebp1 codifica 4E-BP1, un represor de la traducción dependiente del cap sensible a la fosforilación que se une a eIF4E y limita el ensamblaje del complejo de iniciación eIF4F. Como efector canónico aguas abajo de la vía PI3K–AKT–mTOR, 4E-BP1 integra señales de nutrientes, factores de crecimiento y estrés para ajustar la síntesis proteica, el crecimiento celular y los programas metabólicos. La fosforilación mediada por mTORC1 libera eIF4E para promover la traducción de ARNm implicados en proliferación y supervivencia, vinculando a 4E-BP1 con la regulación de la progresión del ciclo celular y las respuestas adaptativas al estrés. La fosforilación desregulada de 4E-BP1 y la disponibilidad de eIF4E se utilizan ampliamente como biomarcadores de una señalización mTOR alterada en contextos como la transformación oncogénica, defectos en la señalización de la insulina y estados inflamatorios, lo que respalda estudios mecanísticos en modelos relevantes para enfermedades.
Las partículas de activación lentiviral 4E-BP1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Eif4ebp1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral 4E-BP1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Eif4ebp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de 4E-BP1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Eif4ebp1 y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.