Plásmido Doble Nickase (h) 3PGDH: sc-401405-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)3PGDH consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa 3PGDH (h) y el plásmido de doble nickasa 3PGDH (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PHGDH. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: 3PGDH Anticuerpo (B-1): sc-390610
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) 3PGDH | sc-401405-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) 3PGDH | sc-401405-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PHGDH codifica la 3-fosfoglicerato deshidrogenasa (3PGDH), la enzima limitante de la velocidad que desvía el intermediario glucolítico 3-fosfoglicerato hacia la vía de biosíntesis de serina fosforilada. Al producir 3-fosfohidroxipiruvato y sostener la disponibilidad posterior de serina y glicina, 3PGDH contribuye al metabolismo de un carbono, a la síntesis de nucleótidos, al equilibrio redox mediante reacciones acopladas a NADPH y al flujo biosintético requerido en estados proliferativos. La actividad alterada de PHGDH se ha asociado con la reprogramación metabólica en modelos de cáncer y con trastornos del neurodesarrollo vinculados a deficiencia de serina, lo que subraya su relevancia para estudios de fenotipos celulares impulsados por el metabolismo. Estas funciones hacen de PHGDH un nodo útil para investigar la comunicación cruzada entre la glucólisis, la homeostasis de aminoácidos y los procesos dependientes de la mitocondria y del ciclo del folato.
3PGDH El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PHGDH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PHGDH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PHGDH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PHGDH alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.