Plásmido Doble Nickase (h) 3β-HSD2: sc-400991-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)3β-HSD2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa 3β-HSD2 (h) y el plásmido de doble nickasa 3β-HSD2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HSD3B2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) 3β-HSD2 | sc-400991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) 3β-HSD2 | sc-400991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSD3B2 codifica la 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa humana tipo 2 (3β-HSD2), una enzima dependiente de NAD⁺ que cataliza la conversión oxidativa de 3β-hidroxiesteroides Δ5 en cetosteroides Δ4, un paso clave en la esteroidogénesis. Esta actividad sustenta la biosíntesis suprarrenal y gonadal de progesterona, androstenediona y precursores relacionados, necesarios para las vías de los glucocorticoides, mineralocorticoides y esteroides sexuales. La función de 3β-HSD2 está estrechamente vinculada a redes esteroidogénicas mitocondriales y del retículo endoplásmico, así como a la señalización endocrina de retroalimentación. Las alteraciones en la actividad o la expresión de HSD3B2 se han asociado con errores congénitos de la biosíntesis de esteroides y fenotipos de desequilibrio esteroideo, por lo que resulta relevante para estudios mecanísticos de la biología suprarrenal y reproductiva.
3β-HSD2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSD3B2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSD3B2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSD3B2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSD3B2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.