3β-HSD CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400825-ACT

HSD3B1 kodiert die 3β‑Hydroxysteroid‑Dehydrogenase/Δ5→Δ4‑Isomerase (3β‑HSD), ein zentrales mikrosomales Enzym, das während der Steroidogenese Δ5‑3β‑Hydroxysteroide in Δ4‑Ketosteroide umwandelt. Dieser katalytische Schritt ist essenziell für die Biosynthese von Progesteron, Androgenen, Glukokortikoiden und Mineralokortikoiden und verknüpft die HSD3B1‑Aktivität mit der endokrinen Homöostase sowie lipidbasierter Signalgebung. Die 3β‑HSD‑Funktion ist in mitochondriale und ER‑basierte Netzwerke des Steroidstoffwechsels eingebunden, einschließlich der Cholesterolverwertung und nachgeschalteter nukleärer Rezeptorsignalwege. Eine dysregulierte Expression oder Aktivität von HSD3B1 wurde mit einer veränderten Steroidhormonbalance in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext hormonabhängiger Krankheitsbiologie sowie stoffwechselorientierter zellulärer Phänotypen untersucht.

3β-HSD Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HSD3B1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

3β-HSD Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HSD3B1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HSD3B1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen 3β-HSD-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HSD3B1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von 3β-HSD-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des 3β-HSD-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HSD3B1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.