20S Proteasome β2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403536

Descripción general

PSMB2 codifica la subunidad catalítica β2 del núcleo 20S del proteasoma humano, un componente central del sistema ubiquitina‑proteasoma que regula el recambio proteico dependiente de ATP y el procesamiento de antígenos. Como parte del proteasoma 26S, la β2 del 20S contribuye a la escisión proteolítica de sustratos poliubiquitinados, modulando la proteostasis, la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y vías de señalización como NF‑κB mediante la degradación regulada de reguladores clave. La actividad del proteasoma influye en la vigilancia inmunitaria al generar péptidos para su presentación por el MHC de clase I y afecta la estabilidad de proteínas implicadas en el daño del ADN y en las vías de apoptosis. La disfunción del proteasoma y los cambios en la expresión de sus subunidades se han implicado en la biología del cáncer, la señalización inflamatoria y fenotipos neurodegenerativos de agregación proteica, lo que convierte a PSMB2 en una diana útil para estudios mecanísticos de la proteostasis y la adaptación celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO 20S Proteasome β2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PSMB2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PSMB2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PSMB2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína 20S Proteasome β2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PSMB2 para la investigación de la señalización de 20S Proteasome β2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PSMB2 críticos para la función de 20S Proteasome β2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PSMB2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido 20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido 20S Proteasome β2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PSMB2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR 20S Proteasome β2 (h) y el plásmido HDR 20S Proteasome β2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PSMB2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PSMB2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.