20S Proteasome α8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-414520

Descripción general

PSMA8 codifica la subunidad alfa 8 del proteasoma 20S, un componente del núcleo del proteasoma que contribuye a la degradación regulada de proteínas y a la generación de péptidos mediante el sistema ubiquitina–proteasoma. Al favorecer el ensamblaje del proteasoma y su capacidad proteolítica, PSMA8 influye en la proteostasis celular, la progresión del ciclo celular y las respuestas adaptativas al estrés vinculadas a la señalización por daño en el ADN y al procesamiento de antígenos. Las alteraciones en la vía del proteasoma pueden remodelar redes de señalización como NF-κB y las cascadas de apoptosis al modificar la estabilidad de proteínas reguladoras clave. La disfunción del proteasoma es ampliamente relevante para la biología de enfermedades, incluido el cáncer (por sus dependencias de proteostasis) y fenotipos relacionados con el sistema inmunitario impulsados por cambios en la degradación proteica y la presentación de péptidos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO 20S Proteasome α8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PSMA8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PSMA8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PSMA8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína 20S Proteasome α8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PSMA8 para la investigación de la señalización de 20S Proteasome α8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PSMA8 críticos para la función de 20S Proteasome α8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PSMA8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido 20S Proteasome α8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido 20S Proteasome α8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PSMA8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR 20S Proteasome α8 (h) y el plásmido HDR 20S Proteasome α8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PSMA8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PSMA8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.