Plásmido CRISPR de Activación (h) 17β-HSD13: sc-415608-ACT

HSD17B13 codifica la 17β-HSD13, un miembro enriquecido en el hígado de la familia de las hidroxiesteroides 17β-deshidrogenasas, implicado en el metabolismo lipídico celular y en el procesamiento de esteroides/retinoides dependiente del estado redox. La proteína se localiza predominantemente en las gotículas lipídicas de los hepatocitos y se asocia con la regulación de la homeostasis de estas gotículas, el manejo de ácidos grasos y las respuestas al estrés metabólico dentro de las vías hepáticas. Estudios genéticos y de expresión relacionan HSD17B13 con la susceptibilidad y la progresión de fenotipos de enfermedad hepática, incluidas las lesiones asociadas a la esteatosis y las afecciones hepáticas inflamatorias. Como resultado, HSD17B13 sirve como un punto de entrada funcional para estudios mecanísticos que conectan el metabolismo hepático, la dinámica del almacenamiento de lípidos y estados celulares relevantes para la patología hepática.

17β-HSD13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HSD17B13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

17β-HSD13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HSD17B13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HSD17B13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de 17β-HSD13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HSD17B13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de 17β-HSD13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía 17β-HSD13 en células tumorales con expresión de HSD17B13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.