15-LO2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404699-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das 15-LO2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- 15-LO2 Double-Nickase-Plasmid (h) und 15-LO2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ALOX15B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: 15-LO2: sc-376795
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
15-LO2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404699-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
15-LO2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404699-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **ALOX15B** kodiert die **15-Lipoxygenase-2 (15-LO2)**, eine nicht-hämhaltige Eisen-Dioxygenase, die mehrfach ungesättigte Fettsäuren oxygeniert und dadurch bioaktive Lipidmediatoren erzeugt, etwa **15-HETE** aus **Arachidonsäure**. Über die Regulation von Eicosanoid- und Netzwerken spezialisierter pro-resolvierender Mediatoren beeinflusst 15-LO2 entzündliche Signalwege, epitheliale Differenzierung, Redox-Homöostase und das Remodeling von Membranlipiden. Die Aktivität von ALOX15B überschneidet sich mit dem Arachidonsäurestoffwechsel, der PPAR-Signalgebung und zytokingetriebenen Signalwegen, die Gewebereaktionen auf Verletzungen und Immunreize prägen. Eine dysregulierte Expression oder veränderte Profile der Lipidprodukte wurden mit entzündungsassoziierten Pathologien und krebsbezogenen Veränderungen des Verhaltens epithelialer Zellen in Verbindung gebracht, was ALOX15B zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen der Lipidsignalgebung macht.
15-LO2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ALOX15B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ALOX15B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ALOX15B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ALOX15B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.