Plásmido Doble Nickase (h) 14-3-3 σ: sc-401096-NIC

SFN codifica la proteína adaptadora humana 14-3-3 sigma (estratifina), miembro de la familia 14-3-3 que se une a motivos de fosfoserina/fosfotreonina para modular la localización y la estabilidad de las proteínas, así como la salida de señalización. Es conocida sobre todo por coordinar el control de los puntos de control del ciclo celular y las respuestas al estrés al influir en reguladores de ciclina-CDK y otros efectores fosforilados, vinculando así la señalización por daño en el ADN con la detención del ciclo celular y programas de diferenciación. A través de estas interacciones, 14-3-3 sigma contribuye a la homeostasis epitelial y a la organización del citoesqueleto, y converge con vías que suelen alterarse en la transformación oncogénica y el estrés genotóxico. Se han descrito alteraciones en la expresión o regulación de SFN en múltiples contextos de cáncer, y con frecuencia se estudia como marcador de disrupción de la señalización de puntos de control y de la biología tumoral epitelial.

14-3-3 σ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SFN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SFN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SFN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SFN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.