Plásmido CRISPR de Activación (h) μ-protocadherin: sc-406015-ACT

CDHR5 codifica la μ-protocadherina, una molécula de adhesión célula–célula dependiente de calcio, enriquecida en tejidos epiteliales polarizados, donde contribuye a la organización de las uniones y al mantenimiento de la arquitectura apical–basal. Al modular los contactos adhesivos y el acoplamiento con el citoesqueleto, la μ-protocadherina influye en los programas de diferenciación epitelial y en procesos relacionados con la barrera que dan forma a la homeostasis tisular. La expresión alterada de CDHR5 se ha asociado con la disrupción de la integridad epitelial y con fenotipos de remodelación relevantes para la transformación oncogénica, los cambios asociados a la invasión y otras patologías epiteliales. Como marcador epitelial con funciones en las interfaces celulares, CDHR5 se examina con frecuencia en estudios sobre señalización dependiente de la adhesión y transiciones de estado epitelial.

μ-protocadherin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDHR5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

μ-protocadherin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDHR5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDHR5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de μ-protocadherin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDHR5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de μ-protocadherin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía μ-protocadherin en células tumorales con expresión de CDHR5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.