Plasmide CRISPR/Cas9 KO κ-casein (h): sc-406821

Présentation

CSN3 code pour la κ‑caséine, une phosphoprotéine sécrétée classiquement décrite comme un composant des micelles de caséine du lait, où elle contribue à la solubilité des protéines et à l’organisation du phosphate de calcium. En tant que glycoprotéine extracellulaire, la κ‑caséine subit des modifications post‑traductionnelles qui influencent les interactions protéine‑protéine et la dynamique de sécrétion, ce qui en fait un substrat modèle pour étudier le traitement dans la voie de sécrétion et le clivage protéolytique. Bien que la biologie de CSN3 soit surtout définie dans des contextes liés à la lactation, des variations de la séquence et de la glycosylation de la κ‑caséine ont été associées à des modifications de la stabilité de la protéine et de la production de peptides bioactifs, ce qui la rend pertinente pour des études mécanistiques du traitement des protéines extracellulaires et de la signalisation. Dans les systèmes humains, CSN3 constitue un locus facilement exploitable pour analyser la régulation de l’expression des protéines sécrétées et les effets en aval de peptides issus de la protéolyse sur les réponses cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO κ-casein (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CSN3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CSN3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CSN3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine κ-casein.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CSN3 pour l'étude de la signalisation de κ-casein, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CSN3 essentiels à la fonction de κ-casein
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CSN3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le κ-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le κ-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CSN3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le κ-casein plasmide HDR (h) et le κ-casein (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CSN3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CSN3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.