Partículas Lentivirales de Activación (m) γ-GCSc: sc-420573-LAC

Gclc codifica la subunidad catalítica de la ligasa de glutamato–cisteína (γ-GCSc), la enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis *de novo* de glutatión que acopla glutamato y cisteína para formar γ-glutamilcisteína. Al controlar la disponibilidad intracelular de glutatión, la γ-GCSc es un regulador central de la homeostasis redox, la desintoxicación de especies reactivas de oxígeno y las respuestas celulares a xenobióticos y al estrés electrofílico, con vínculos estrechos con programas antioxidantes impulsados por NRF2 y con la sensibilidad a la ferroptosis. En sistemas murinos, la actividad alterada de Gclc se utiliza con frecuencia para modelar la biología del estrés oxidativo en hígado, pulmón, cerebro y células inmunitarias, donde el amortiguamiento dependiente de glutatión influye en la función mitocondrial, la señalización inflamatoria y la adaptación metabólica. La síntesis de glutatión desregulada y la expresión de Gclc se han asociado con la susceptibilidad a lesiones inducidas por tóxicos y con el desequilibrio redox observado en diversos modelos de enfermedades neurodegenerativas, metabólicas e inflamatorias.

Las partículas de activación lentiviral γ-GCSc (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Gclc en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral γ-GCSc (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Gclc, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de γ-GCSc. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Gclc y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.