γ-FRCRISPR激活质粒(h): sc-403347-ACT

人类 FOLR3 基因编码 γ-叶酸受体（γ-FR），它是叶酸受体家族成员之一，通过糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定于细胞膜。γ-FR 参与叶酸结合与细胞内叶酸稳态维持，从而支持核苷酸生物合成与甲基化反应所需的一碳代谢。由于与叶酸可利用性密切相关，γ-FR 也与影响 DNA 复制与修复、氧化还原平衡以及表观遗传调控的通路相联系——这些过程在快速增殖或发生代谢重编程的细胞中常常受到扰动。叶酸受体表达水平的差异已在造血与免疫细胞生物学，以及叶酸代谢和甲基化状态改变会导致转录程序异常的相关疾病背景中得到研究。作为一种细胞表面相关的叶酸结合蛋白，γ-FR 也为在人类细胞模型中研究受体介导的营养物质处理及其下游代谢表型提供了一个易于操作的切入点。

γ-FR CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FOLR3的表达。

γ-FR CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的FOLR3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于FOLR3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性γ-FR表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的FOLR3位点，并能够研究内源性位点上依赖于γ-FR的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FOLR3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟γ-FR通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。