γ Enolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420179

Übersicht

Eno2 kodiert die γ-Enolase (neuronspezifische Enolase), ein glykolytisches Enzym, das die Umwandlung von 2‑Phosphoglycerat zu Phosphoenolpyruvat katalysiert und den neuronalen Energiestoffwechsel unterstützt. Bei der Maus ist die γ-Enolase in Neuronen und neuroendokrinen Geweben angereichert und verknüpft den zentralen Kohlenstoffstoffwechsel mit zellulären Programmen, die an Differenzierung, Überleben und Stressanpassung beteiligt sind. Eine veränderte Expression von ENO2/γ-Enolase wird широко als Marker für den Zustand neuronaler und neuroendokriner Zellen genutzt und wurde mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration, hypoxische/ischämische Schädigung und Tumorstoffwechsel relevant sind. Diese Eigenschaften machen Eno2 zu einem nützlichen Ausgangspunkt für die Untersuchung metabolischer Umprogrammierung und zelltypspezifischer Regulation im Nervensystem.

Das γ Enolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Eno2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Eno2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Eno2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die γ Enolase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Eno2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der γ Enolase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Eno2-Exone abzielen, die für die γ Enolase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Eno2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom γ Enolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom γ Enolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Eno2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das γ Enolase HDR-Plasmid (m) und γ Enolase HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Eno2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Eno2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.