γE-crystallin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419832

Descripción general

Cryge codifica la γE-cristalina, una proteína estructural de las células de las fibras del cristalino perteneciente a la superfamilia de las β/γ-cristalinas, que contribuye al índice de refracción excepcionalmente alto y a la transparencia a largo plazo del cristalino. La γE-cristalina participa en el proceso estrechamente regulado de diferenciación y maduración de las células de las fibras del cristalino, donde el empaquetamiento de las cristalinas, la estabilidad proteica y la resistencia a la agregación son aspectos centrales de la proteostasis. La alteración de la homeostasis de las cristalinas puede favorecer la formación de agregados que dispersan la luz y comprometer la biomecánica del cristalino, lo que vincula las perturbaciones de genes de cristalinas con fenotipos asociados a cataratas y mecanismos relacionados de opacificación del cristalino. En modelos murinos, Cryge se estudia para comprender la organización de la red de cristalinas, las modificaciones postraduccionales y las respuestas al estrés que influyen en la claridad del cristalino con el tiempo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO γE-crystallin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cryge en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cryge junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cryge tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína γE-crystallin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cryge para la investigación de la señalización de γE-crystallin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cryge críticos para la función de γE-crystallin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cryge para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido γE-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido γE-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cryge. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR γE-crystallin (m) y el plásmido HDR γE-crystallin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cryge para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cryge definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.