Plasmide CRISPR d'Activation (h) γ-catenin: sc-401640-ACT

JUP code la γ-caténine (plakoglobine), une protéine à répétitions armadillo qui constitue un composant central des desmosomes et des jonctions d’adhérence, reliant les complexes de cadherines aux filaments intermédiaires ainsi qu’aux réseaux associés à l’actine afin de maintenir l’intégrité des tissus épithéliaux et cardiaques. Par ses interactions avec les desmogléines, les desmocollines, les plakophilines et la desmoplakine, la γ-caténine coordonne l’assemblage des jonctions, la mécanotransduction et la régulation, dépendante du contact, de la migration et de la différenciation cellulaires. La γ-caténine participe également au dialogue avec la signalisation Wnt/β-caténine en modulant des programmes transcriptionnels et la dynamique de la signalisation des jonctions vers le noyau. Une expression dérégulée de JUP ou une localisation jonctionnelle anormale est associée à une altération de l’adhérence, à un comportement invasif et à des défauts structuraux des cardiomyocytes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la fonction barrière, du remodelage tissulaire et des voies de signalisation impliquées dans les maladies.

γ-catenin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JUP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

γ-catenin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JUP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JUP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de γ-catenin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JUP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de γ-catenin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie γ-catenin dans les cellules tumorales présentant une expression de JUP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.