γB-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402939

Visão geral

CRYGB codifica a γB-cristalina, uma proteína estrutural solúvel e altamente abundante no cristalino do olho dos vertebrados, que contribui para o índice de refração e para a transparência do cristalino a longo prazo. A γB-cristalina participa da montagem da rede de cristalinas e de processos de homeostase proteica que mantêm a integridade das células das fibras do cristalino, nas quais o empacotamento compacto e a estabilidade são essenciais para minimizar a dispersão da luz. A desestabilização das cristalinas ou o aumento da suscetibilidade à agregação está associado a fenótipos de opacificação do cristalino, tornando o CRYGB um locus relevante para estudar mecanismos de enovelamento incorreto de proteínas e proteostase em tecidos oculares diferenciados. Como as células das fibras do cristalino são em grande parte pós-mitóticas, o CRYGB também fornece um modelo para investigar como proteínas de longa duração respondem ao estresse oxidativo e ambiental ao longo do tempo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO γB-crystallin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CRYGB em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CRYGB, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CRYGB na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína γB-crystallin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CRYGB para a investigação da sinalização de γB-crystallin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CRYGB críticos para a função γB-crystallin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CRYGB para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo γB-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo γB-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CRYGB. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo γB-crystallin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR γB-crystallin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CRYGB para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CRYGB definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.