Plásmido CRISPR de Activación (h) γ1 Tubulin: sc-400327-ACT

TUBG1 codifica la tubulina γ1 humana, un componente central del complejo en anillo de γ-tubulina que nuclea microtúbulos en los centrosomas y en otros centros organizadores de microtúbulos. Al sostener el ensamblaje del huso mitótico, la integridad del centrosoma y la progresión del ciclo celular, la tubulina γ1 ayuda a coordinar la segregación cromosómica y una división celular fiel. La dinámica de los microtúbulos dependiente de TUBG1 se entrecruza con vías que regulan la organización del citoesqueleto, el tráfico intracelular y procesos del neurodesarrollo que requieren una función centrosomal precisa. La desregulación de la nucleación de microtúbulos y de la mecánica del huso es relevante para la inestabilidad genómica y fenotipos proliferativos, lo que convierte a TUBG1 en un nodo útil para estudiar la biología de enfermedades vinculadas a la división celular.

γ1 Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TUBG1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

γ1 Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TUBG1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TUBG1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de γ1 Tubulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TUBG1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de γ1 Tubulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía γ1 Tubulin en células tumorales con expresión de TUBG1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.