Plásmido CRISPR de Activación (h) γ1-Adaptin: sc-403986-ACT

AP1G1 codifica la subunidad γ1-adaptina humana del complejo adaptador de proteínas 1 (AP-1), un componente central de la cubierta que selecciona la carga e impulsa la formación de vesículas mediada por clatrina en la red trans-Golgi y los endosomas. Al reconocer motivos de clasificación en proteínas transmembrana, la γ1-adaptina ayuda a coordinar el reciclaje de receptores, el direccionamiento a lisosomas y el tráfico de membrana polarizado, influyendo así en la duración de la señalización y en la composición de la membrana. El tráfico dependiente de AP-1 se interrelaciona con la maduración endosomal y las vías de autofagia-lisosoma, apoyando la proteostasis y la secreción regulada. Las alteraciones en la función del complejo adaptador y en la dinámica del transporte vesicular son ampliamente relevantes para la investigación de fenotipos del neurodesarrollo, el tráfico de receptores en células inmunitarias y la señalización desregulada de factores de crecimiento observada en múltiples contextos de enfermedad.

γ1-Adaptin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AP1G1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

γ1-Adaptin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AP1G1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AP1G1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de γ1-Adaptin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AP1G1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de γ1-Adaptin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía γ1-Adaptin en células tumorales con expresión de AP1G1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.