ε Tubulin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405619
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ε Tubulin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ε Tubulin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ε Tubulin Anticuerpo (5F3B7): sc-517236
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ε Tubulin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405619 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TUBE1 codifica la ε-tubulina, un miembro altamente conservado de la familia de las tubulinas implicado en la biología de los centriolos y en la organización basada en microtúbulos. La ε-tubulina se ha asociado con la duplicación de los centriolos y la integridad del centrosoma, procesos que coordinan el ensamblaje del huso mitótico, la segregación cromosómica y la progresión del ciclo celular. La alteración de la homeostasis del centrosoma se relaciona con inestabilidad genómica y señales proliferativas modificadas, conectando las perturbaciones de la red de tubulinas con fenotipos relevantes para el cáncer. Como tubulina asociada a los centriolos, la ε-tubulina también es de interés para estudiar defectos en la división celular y el transporte dependiente de microtúbulos en células humanas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ε Tubulin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TUBE1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TUBE1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TUBE1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ε Tubulin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TUBE1 para la investigación de la señalización de ε Tubulin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TUBE1 críticos para la función de ε Tubulin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TUBE1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ε Tubulin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ε Tubulin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TUBE1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ε Tubulin (h) y el plásmido HDR ε Tubulin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TUBE1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TUBE1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.