ε Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405619

概要

TUBE1はε-チューブリンをコードしており、ε-チューブリンはチューブリンファミリーの中でも高度に保存されたメンバーで、中心小体の生物学および微小管に基づく細胞内構造の形成に関与すると考えられています。ε-チューブリンは、中心小体の複製や中心体の完全性の維持に関連づけられており、これらの過程は有糸分裂紡錘体の組み立て、染色体分配、細胞周期進行の調整に関わります。中心体恒常性の破綻はゲノム不安定性や増殖シグナルの異常と関連し、チューブリンネットワークの撹乱ががんに関連する表現型につながる可能性を示しています。中心小体関連チューブリンとして、ε-チューブリンはヒト細胞における細胞分裂異常や微小管依存的輸送の研究においても注目されています。

ε Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTUBE1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TUBE1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TUBE1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ε Tubulinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ε Tubulinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TUBE1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ε Tubulinの機能に不可欠なTUBE1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TUBE1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ε Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびε Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TUBE1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ε Tubulin HDRプラスミド（h）および ε Tubulin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTUBE1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTUBE1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。