Plásmido Doble Nickase (h) δENaC: sc-404577-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)δENaC consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa δENaC (h) y el plásmido de doble nickasa δENaC (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SCNN1D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) δENaC | sc-404577-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) δENaC | sc-404577-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SCNN1D codifica la subunidad delta del canal epitelial de sodio (δENaC), un canal de Na⁺ no dependiente de voltaje y sensible a la amilorida que contribuye a la absorción transepitelial de sodio y a la regulación del potencial de membrana. δENaC puede ensamblarse con otras subunidades de ENaC para influir en la compuerta (gating) del canal y en la selectividad iónica, apoyando la homeostasis de electrolitos y fluidos en tejidos epiteliales. La actividad de ENaC se regula mediante procesamiento proteolítico, ubiquitinación por NEDD4L y señales que afectan el tráfico del canal y su probabilidad de apertura, lo que vincula a SCNN1D con vías que controlan el transporte epitelial. La alteración de la función de ENaC se ha implicado en trastornos del equilibrio de sal y líquidos y se ha estudiado en el contexto de la hidratación de la superficie de las vías respiratorias y de fenotipos relacionados con la presión arterial.
δENaC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SCNN1D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SCNN1D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SCNN1D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SCNN1D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.