Plasmide CRISPR/Cas9 KO β ig-h3 (h): sc-403770

Présentation

TGFBI code pour β ig-h3 (TGFBIp), une protéine de la matrice extracellulaire induite par la signalisation du TGF-β, qui se lie aux collagènes, à la fibronectine et aux intégrines afin de réguler l’adhérence cellulaire, la migration et l’organisation de la matrice. Par ses rôles dans le remodelage de la MEC et la signalisation médiée par les intégrines, β ig-h3 influence la transition épithélio-mésenchymateuse, la réparation des plaies et l’homéostasie tissulaire. Une expression altérée de TGFBI a été associée à des processus fibrosants et à des interactions tumeur–stroma affectant l’invasion et le potentiel métastatique. Des variants pathogènes et une déposition dysrégulée de β ig-h3 sont également liés aux dystrophies du stroma cornéen et à une agrégation protéique anormale dans les tissus oculaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β ig-h3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TGFBI dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TGFBI, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TGFBI à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β ig-h3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TGFBI pour l'étude de la signalisation de β ig-h3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TGFBI essentiels à la fonction de β ig-h3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TGFBI pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β ig-h3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le β ig-h3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TGFBI. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β ig-h3 plasmide HDR (h) et le β ig-h3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TGFBI pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TGFBI définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.