Plasmide Double Nickase (h) β-FR: sc-403346-NIC

FOLR2 code pour le récepteur du folate bêta (β-FR), un récepteur de surface cellulaire ancré via un glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui se lie aux folates réduits et assure une captation dépendante du récepteur afin de soutenir le métabolisme à un carbone. En modulant la disponibilité intracellulaire en folates, β-FR influence la biosynthèse des nucléotides ainsi que les réactions de méthylation, essentielles aux programmes de prolifération et de différenciation. FOLR2 est enrichi dans les populations de la lignée myéloïde, en particulier dans certains sous-ensembles de macrophages tissulaires, ce qui relie son expression aux états d’activation des cellules immunitaires et au remodelage du microenvironnement. Une expression altérée de FOLR2 a été associée à la biologie de l’inflammation et à des caractéristiques liées aux macrophages observées dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud fonctionnel pour les études mécanistiques.

β-FR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOLR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOLR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOLR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOLR2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.