Plásmido Doble Nickase (h) β-casein: sc-402248-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)β-casein consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa β-casein (h) y el plásmido de doble nickasa β-casein (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CSN2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: β-casein Anticuerpo (F20.14): sc-53189
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) β-casein | sc-402248-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) β-casein | sc-402248-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSN2 codifica la β-caseína humana, una fosfoproteína secretada mayoritaria de la leche que contribuye a la formación de micelas y facilita el aporte de calcio, fosfato y péptidos bioactivos durante la lactancia. Su expresión está estrechamente regulada en el epitelio mamario por la señalización de hormonas lactogénicas, en particular el eje prolactina–JAK2/STAT5, con aportes adicionales del receptor de glucocorticoides y de las vías de insulina/PI3K que coordinan la diferenciación y la función secretora. La alteración de la regulación de la β-caseína se usa ampliamente como indicador del estado de diferenciación del epitelio mamario y de los programas transcripcionales asociados a la lactancia, lo que convierte a CSN2 en un marcador molecular útil en estudios del desarrollo de la glándula mamaria y del control endocrino de la expresión génica. Las redes génicas de proteínas de la leche desreguladas, incluido CSN2, se examinan con frecuencia en contextos como la fisiología de la lactancia deteriorada y cambios en los programas de linaje epitelial relevantes para la investigación en biología mamaria.
β-casein El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CSN2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CSN2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CSN2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CSN2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.