Plasmide CRISPR/Cas9 KO β-casein (h): sc-402248
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- β-casein Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique β-casein, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: β-casein Antibody (F20.14): sc-53189
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO β-casein (h) | sc-402248 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CSN2 code la β‑caséine humaine, une phosphoprotéine sécrétée qui constitue un composant majeur du lait et contribue à la nutrition néonatale en liant le calcium et le phosphate au sein des micelles de caséine. Son expression est étroitement régulée au cours de la différenciation de l’épithélium mammaire et de la lactation, intégrant des signaux endocriniens via la voie récepteur de la prolactine–JAK2/STAT5 ainsi que des voies coopérantes qui façonnent les programmes sécrétoires. Le niveau de transcription de CSN2 est couramment utilisé comme marqueur d’une différenciation lactogène fonctionnelle et de l’état de développement de la glande mammaire dans des modèles cellulaires. La dérégulation des programmes géniques des protéines du lait, dont CSN2, est pertinente pour les études de la plasticité épithéliale mammaire et de la biologie mammaire, où des signatures de différenciation altérées peuvent accompagner des phénotypes associés à la maladie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β-casein (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CSN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CSN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CSN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β-casein.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CSN2 pour l'étude de la signalisation de β-casein, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CSN2 essentiels à la fonction de β-casein
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CSN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le β-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le β-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CSN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le β-casein plasmide HDR (h) et le β-casein (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CSN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CSN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.