β-casein Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402248-ACT

CSN2 codifica a β-caseína humana, uma importante proteína do leite sintetizada por células epiteliais mamárias diferenciadas e comumente utilizada como um marcador de diferenciação lactogênica. A expressão de β-caseína é regulada por sinalização endócrina e por citocinas, integrando a ativação prolactina–JAK2/STAT5 com as vias de glicocorticoides e insulina para coordenar programas transcricionais durante o desenvolvimento da glândula mamária. Em sistemas modelo, CSN2 atua como um marcador funcional de ativação secretória e maturação epitelial, conectando o estado da cromatina e o uso de enhancers à expressão gênica específica de linhagem. A desregulação dessas redes associadas à diferenciação é relevante para estudos de plasticidade do epitélio mamário, respostas ao estresse e alterações no controle transcricional observadas na biologia de doenças mamárias.

β-casein O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β-casein O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β-casein. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β-casein no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β-casein em células tumorais com expressão de CSN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.