Plasmide Double Nickase (h) β-Arrestin-2: sc-416686-NIC

ARRB2 code la β-arrestine‑2 humaine, un adaptateur multifonctionnel qui met fin à la signalisation en aval des RCPG activés et la reconfigure en favorisant la désensibilisation, l’internalisation et le trafic des récepteurs. Au-delà du découplage canonique des protéines G, la β-arrestine‑2 sert d’échafaudage à des modules de signalisation tels que MAPK/ERK, PI3K–AKT et NF‑κB, influençant ainsi les programmes transcriptionnels, la dynamique du cytosquelette et les réponses inflammatoires. Elle interagit également avec la machinerie endocytaire et les voies d’ubiquitination pour réguler le devenir des récepteurs et la durée des signaux. Une signalisation biaisée des β-arrestines dérégulée et une expression altérée d’ARRB2 ont été impliquées dans divers processus liés aux maladies, notamment la signalisation associée aux tumeurs, l’activation des cellules immunitaires, la fibrose, ainsi que des phénotypes neuropsychiatriques et métaboliques.

β-Arrestin-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARRB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARRB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARRB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARRB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.