Plásmido CRISPR de Activación (h) β-Arrestin-2: sc-416686-ACT

ARRB2 codifica β-arrestina-2, un adaptador multifuncional que regula la desensibilización, la internalización y el tráfico de los receptores acoplados a proteína G (GPCR) tras la fosforilación del receptor por las GRK. Más allá de terminar la señalización mediada por proteínas G, la β-arrestina-2 actúa como plataforma de ensamblaje de complejos de señalización que modulan las vías MAPK/ERK, PI3K–AKT y NF-κB, determinando la duración de la señal y su localización subcelular. A través de estas interacciones, ARRB2 influye en la migración celular, la señalización inflamatoria y la señalización sesgada del receptor en diversos sistemas de GPCR. La señalización dependiente de β-arrestina desregulada se ha vinculado en la literatura con redes de señalización asociadas al cáncer, la regulación cardiometabólica y procesos neuroinmunes, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios centrados en vías.

β-Arrestin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARRB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-Arrestin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARRB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARRB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-Arrestin-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARRB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-Arrestin-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-Arrestin-2 en células tumorales con expresión de ARRB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.