βA4-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419824

Übersicht

Cryba4 kodiert βA4‑Kristallin, ein wichtiges strukturelles Kristallin der Augenlinse der Maus, das zu den Brechungseigenschaften und zur langfristigen Transparenz der Linse beiträgt. Als Mitglied der β/γ‑Kristallin‑Superfamilie ist βA4‑Kristallin an der Differenzierung von Linsenfaserzellen sowie an der Bildung dicht gepackter, hochgeordneter Proteinassemblies beteiligt, die die optische Homogenität aufrechterhalten. Seine Stabilität und seine Wechselwirkungen innerhalb von Kristallin‑Netzwerken beeinflussen Prozesse der Proteinhomöostase wie chaperonvermittelte Faltung und den Schutz vor Aggregation unter oxidativem sowie altersassoziiertem Stress. Eine Störung oder Fehlregulation der Kristallin‑Zusammensetzung wird mit Phänotypen der Linsentrübung in Verbindung gebracht, was Cryba4 als relevanten Lokus für kataraktbezogene Mechanismen und Studien zur Augenentwicklung stützt.

Das βA4-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cryba4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cryba4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cryba4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die βA4-crystallin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cryba4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der βA4-crystallin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cryba4-Exone abzielen, die für die βA4-crystallin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cryba4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom βA4-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom βA4-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cryba4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das βA4-crystallin HDR-Plasmid (m) und βA4-crystallin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cryba4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cryba4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.