Plásmido CRISPR de Activación (h) β8 Tubulin: sc-401438-ACT

TUBB8 codifica la tubulina β8, un isotipo de β-tubulina específico de primates que forma heterodímeros con la α-tubulina para generar microtúbulos, sustentando la organización del citoesqueleto, el transporte intracelular y la segregación cromosómica durante la división celular. La dinámica de los microtúbulos, regulada por la composición de isotipos de tubulina, influye en el ensamblaje del huso, la polaridad celular y las vías de tráfico que coordinan la mitosis y los procesos tempranos del desarrollo. En humanos, las variaciones en TUBB8 se asocian con defectos en la integridad del huso meiótico del ovocito y en la competencia embrionaria temprana, lo que lo hace relevante para estudios de biología reproductiva y regulación del citoesqueleto. El comportamiento alterado de la red de tubulina también resulta ampliamente informativo para modelar respuestas al estrés, errores mitóticos y fenotipos asociados a microtúbulos en sistemas celulares.

β8 Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TUBB8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β8 Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TUBB8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TUBB8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β8 Tubulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TUBB8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β8 Tubulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β8 Tubulin en células tumorales con expresión de TUBB8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.