β4 Tubulin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400058

Descripción general

TUBB4A codifica la tubulina β4, un isotipo de β-tubulina enriquecido en neuronas que polimeriza con la α-tubulina para formar microtúbulos, sustentando la arquitectura del huso mitótico, el transporte intracelular y el crecimiento de neuritas. El recambio dinámico de los microtúbulos sustenta procesos como el transporte axonal y la remodelación del citoesqueleto, integrándose con vías que coordinan la progresión del ciclo celular y la diferenciación neuronal. Las alteraciones en la función de TUBB4A perturban el ensamblaje y la estabilidad de los microtúbulos, lo que vincula este gen con fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos en estudios genéticos. Como componente central del citoesqueleto, la tubulina β4 proporciona un punto de entrada mecanístico para investigar la señalización dependiente de microtúbulos y la vulnerabilidad al estrés del citoesqueleto en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β4 Tubulin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TUBB4A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TUBB4A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TUBB4A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β4 Tubulin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TUBB4A para la investigación de la señalización de β4 Tubulin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TUBB4A críticos para la función de β4 Tubulin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TUBB4A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β4 Tubulin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido β4 Tubulin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TUBB4A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β4 Tubulin (h) y el plásmido HDR β4 Tubulin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TUBB4A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TUBB4A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.