β2C Tubulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400056

Panoramica

TUBB4B codifica la tubulina β2C, un componente fondamentale degli eterodimeri α/β-tubulina che polimerizzano in microtubuli a supporto dell’architettura del citoscheletro, del trasporto intracellulare e dell’assemblaggio del fuso mitotico. Il rimodellamento dinamico dei microtubuli è alla base di processi quali la progressione del ciclo cellulare, il posizionamento degli organelli e la ciliogenesi, e si integra con vie di segnalazione che regolano la polarità e le risposte allo stress. Alterazioni dell’equilibrio tra isòtipi di tubulina e della dinamica dei microtubuli sono frequentemente associate a fenotipi proliferativi, instabilità cromosomica e cambiamenti del comportamento migratorio osservati in molteplici contesti patologici. In quanto nodo strutturale e regolatorio nella biologia dipendente dai microtubuli, la tubulina β2C è un bersaglio utile per analizzare il controllo citoscheletrico della divisione cellulare e del traffico intracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β2C Tubulin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TUBB4B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TUBB4B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TUBB4B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β2C Tubulin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TUBB4B per lo studio della segnalazione di β2C Tubulin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TUBB4B critici per la funzione di β2C Tubulin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TUBB4B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β2C Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β2C Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TUBB4B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β2C Tubulin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β2C Tubulin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TUBB4B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TUBB4B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.