Plásmido Doble Nickase (h) β2A Tubulin: sc-400054-NIC

TUBB2A codifica la tubulina humana β2A, un componente central de los heterodímeros de tubulina α/β que se polimerizan para formar microtúbulos y sostener la arquitectura del citoesqueleto, el transporte intracelular y el ensamblaje del huso mitótico. La dinámica de los microtúbulos coordina procesos que abarcan el tráfico vesicular, la polaridad celular y la segregación cromosómica, integrándose con vías de control del ciclo celular y de morfogénesis neuronal. La alteración de la composición de la β-tubulina o la inestabilidad de los microtúbulos puede perturbar programas del neurodesarrollo y se ha asociado con fenotipos de tubulinopatías, incluidas malformaciones corticales y manifestaciones relacionadas con la epilepsia. Como proteína citoesquelética altamente conservada, la tubulina β2A también se utiliza para investigar mecanismos de señalización dependiente de microtúbulos y respuestas al estrés en células humanas.

β2A Tubulin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TUBB2A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TUBB2A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TUBB2A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TUBB2A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.