Plasmide Double Nickase (h) β2A Tubulin: sc-400054-NIC

TUBB2A code la tubuline β2A humaine, un composant central des hétérodimères α/β‑tubuline qui polymérisent en microtubules afin de soutenir l’architecture du cytosquelette, le transport intracellulaire et l’assemblage du fuseau mitotique. La dynamique des microtubules coordonne des processus allant du trafic vésiculaire à la polarité cellulaire et à la ségrégation des chromosomes, en s’intégrant aux voies de contrôle du cycle cellulaire et de morphogenèse neuronale. Une composition altérée en β‑tubuline ou une instabilité des microtubules peut perturber les programmes de neurodéveloppement et a été associée à des phénotypes de tubulinopathie, notamment des malformations corticales et des tableaux cliniques liés à l’épilepsie. En tant que protéine cytosquelettique hautement conservée, la tubuline β2A est également utilisée pour étudier les mécanismes de signalisation dépendante des microtubules et les réponses au stress dans les cellules humaines.

β2A Tubulin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TUBB2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TUBB2A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TUBB2A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TUBB2A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.