β2A Tubulin Plasmide Double Nickase (h): sc-400054-NIC

TUBB2A codifica la β2A-tubulina umana, un componente fondamentale degli eterodimeri di α/β-tubulina che polimerizzano in microtubuli per sostenere l’architettura del citoscheletro, il trasporto intracellulare e l’assemblaggio del fuso mitotico. La dinamica dei microtubuli coordina processi che vanno dal traffico vescicolare alla polarità cellulare e alla segregazione dei cromosomi, integrandosi con il controllo del ciclo cellulare e con le vie della morfogenesi neuronale. Alterazioni nella composizione della β-tubulina o l’instabilità dei microtubuli possono perturbare i programmi di neurosviluppo e sono state associate a fenotipi di tubulinopatia, incluse malformazioni corticali e manifestazioni correlate all’epilessia. In quanto proteina citoscheletrica altamente conservata, la β2A-tubulina è utilizzata anche per studiare i meccanismi della segnalazione dipendente dai microtubuli e le risposte allo stress nelle cellule umane.

β2A Tubulin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TUBB2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TUBB2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TUBB2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TUBB2A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.