β-2-Microglobulin CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419281-ACT

B2m kodiert β‑2‑Mikroglobulin, eine konservierte Komponente von MHC‑Klasse‑I‑Komplexen, die für die korrekte Faltung, Stabilität an der Zelloberfläche und die Peptidpräsentation an CD8+‑T‑Zellen erforderlich ist. In Mauszellen unterstützt β‑2‑Mikroglobulin Antigenverarbeitungs‑ und Präsentationswege, die Immunüberwachung, interferonresponsive Genprogramme und Toleranzmechanismen koordinieren. Veränderte B2m‑Expression oder ‑Funktion wird häufig als Modell für Veränderungen der MHC‑I‑Präsentation eingesetzt, die die Immunerkennung, Entzündung und Wirt‑Pathogen‑Interaktionen beeinflussen. Als „Housekeeping“-Bestandteil des Immunsystems ist es auch für Studien zur Transplantationsbiologie, zu Tumor‑Immun‑Interaktionen und zu Zell‑Engineering‑Workflows relevant, bei denen eine Modulation von MHC I die Immunkompatibilität beeinflusst.

β-2-Microglobulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen B2m-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

β-2-Microglobulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des B2m-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der B2m-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen β-2-Microglobulin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native B2m-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von β-2-Microglobulin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des β-2-Microglobulin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem B2m-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.