Plásmido CRISPR de Activación (h) β-2-Microglobulin: sc-417704-ACT

B2M codifica la β-2-microglobulina, una subunidad no covalente esencial de las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase I, necesaria para el plegamiento adecuado, la estabilidad y la presentación en la superficie celular de los complejos péptido–MHC. Al apoyar el procesamiento y la presentación de antígenos, la β-2-microglobulina contribuye a las vías de vigilancia inmunitaria que moldean el reconocimiento por parte de los linfocitos T citotóxicos y las interacciones con receptores inhibidores de las células NK. La alteración de la expresión o la función de B2M se examina con frecuencia en contextos de evasión inmunitaria, estados de señalización impulsados por interferón y defectos de presentación de antígenos en diversos modelos tumorales e inflamatorios. Como componente ampliamente expresado en células nucleadas, B2M también se utiliza como indicador de la integridad de la vía de MHC I y de la regulación del inmunopeptidoma.

β-2-Microglobulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de B2M sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-2-Microglobulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus B2M en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional B2M, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-2-Microglobulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo B2M y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-2-Microglobulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-2-Microglobulin en células tumorales con expresión de B2M silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.