Plasmide CRISPR d'Activation (h) β-2-Microglobulin: sc-417704-ACT

B2M code la β2-microglobuline, une sous-unité non covalente essentielle des molécules du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) de classe I, indispensable au repliement correct, à la stabilité et à la présentation à la surface cellulaire des complexes peptide–CMH. En soutenant le traitement et la présentation des antigènes, la β2-microglobuline contribue aux voies de surveillance immunitaire qui façonnent la reconnaissance par les lymphocytes T cytotoxiques ainsi que les interactions avec les récepteurs inhibiteurs des cellules NK. Les altérations de l’expression ou de la fonction de B2M sont fréquemment étudiées dans des contextes d’échappement immunitaire, d’états de signalisation induits par les interférons et de défauts de présentation antigénique dans divers modèles tumoraux et inflammatoires. Comme composant largement exprimé des cellules nucléées, B2M est également utilisée comme indicateur de l’intégrité de la voie du CMH I et de la régulation de l’immunopeptidome.

β-2-Microglobulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de B2M sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

β-2-Microglobulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus B2M dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription B2M, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de β-2-Microglobulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus B2M natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de β-2-Microglobulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie β-2-Microglobulin dans les cellules tumorales présentant une expression de B2M silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.