Plásmido Doble Nickase (h) β2-Adaptin: sc-402404-NIC

AP2B1 codifica la β2-adaptina, una subunidad central del complejo proteico adaptador 2 (AP-2) que conecta los receptores de carga con la clatrina durante la endocitosis mediada por clatrina en la membrana plasmática. Mediante el reconocimiento de motivos de clasificación y la coordinación con factores accesorios, la β2-adaptina ayuda a regular la internalización y el reciclaje de receptores, transportadores y complejos de señalización, influyendo en vías como la señalización de receptores tirosina cinasa y el ciclo de vesículas sinápticas. El tráfico dependiente de AP-2 contribuye al control de la composición de la membrana y a la atenuación de señales, y sus alteraciones pueden afectar la homeostasis celular y las respuestas al estrés. La función alterada de adaptadores endocíticos se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con un tráfico de receptores desregulado observado en contextos de señalización relevantes para el cáncer.

β2-Adaptin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AP2B1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AP2B1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AP2B1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AP2B1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.