β1-Adaptin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402948

Descripción general

AP1B1 codifica la β1-adaptina, la subunidad β del complejo proteico adaptador 1 (AP-1), que acopla el reconocimiento de la carga a la formación de vesículas mediada por clatrina en la red trans-Golgi y los endosomas. Al unirse a motivos de clasificación en proteínas transmembrana y coordinarse con pequeñas GTPasas y factores accesorios, AP-1 regula el tráfico polarizado, el reciclaje endosomal y el transporte dirigido a lisosomas que sostienen la composición de la membrana y la homeostasis de la señalización. La alteración de la clasificación dependiente de AP1B1 perturba la polaridad epitelial y puede modificar la distribución de receptores, la localización de transportadores de nutrientes y las vías de proteostasis vinculadas a las respuestas celulares al estrés. La variación genética en AP1B1 se ha asociado con fenotipos neurodeliberativos y relacionados con el tráfico intracelular, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la disfunción del transporte vesicular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β1-Adaptin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AP1B1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AP1B1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AP1B1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β1-Adaptin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AP1B1 para la investigación de la señalización de β1-Adaptin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AP1B1 críticos para la función de β1-Adaptin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AP1B1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β1-Adaptin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido β1-Adaptin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AP1B1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β1-Adaptin (h) y el plásmido HDR β1-Adaptin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AP1B1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AP1B1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.