Plásmido CRISPR de Activación (h) β1-Adaptin: sc-402948-ACT

AP1B1 codifica la β1-adaptina, una subunidad central del complejo adaptador de proteínas 1 (AP-1), que acopla el reconocimiento de carga a la formación de vesículas mediada por clatrina en la red trans-Golgi y los endosomas. Al unirse a motivos de clasificación en proteínas transmembrana, AP-1 coordina el tráfico polarizado, el reciclaje endosomal y el mantenimiento de la composición de membrana en células epiteliales y neuronales. La alteración del transporte dependiente de AP-1 perturba la localización de receptores y las salidas de señalización, lo que vincula la disfunción de AP1B1 con defectos en la polaridad celular, procesos del neurodesarrollo y la homeostasis de proteínas de membrana. Como nodo central del tráfico intracelular, la β1-adaptina se estudia con frecuencia en el contexto de la dinámica endosoma–Golgi, la fidelidad de la clasificación de carga y la comunicación entre orgánulos.

β1-Adaptin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AP1B1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β1-Adaptin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AP1B1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AP1B1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β1-Adaptin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AP1B1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β1-Adaptin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β1-Adaptin en células tumorales con expresión de AP1B1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.