Partículas Lentivirales de Activación (h) β-1,4-GalNAc-T4: sc-410420-LAC

B4GALNT4 codifica la beta-1,4-GalNAc-T4, una glicosiltransferasa residente del aparato de Golgi que transfiere N-acetilgalactosamina a glicoconjugados, dando forma a las estructuras terminales de carbohidratos en glicoproteínas y glicolípidos. A través de su papel en la glicosilación de proteínas y lípidos, la beta-1,4-GalNAc-T4 influye en la organización de la membrana, el tráfico de receptores y los procesos de reconocimiento célula–célula que se integran con la función de la vía secretora. Los programas de glicosilación alterados se asocian con frecuencia con una adhesión y una señalización desreguladas en enfermedades complejas, lo que convierte a B4GALNT4 en una diana útil para investigar cómo la remodelación de glicanos afecta a los fenotipos celulares.

Las partículas de activación lentiviral β-1,4-GalNAc-T4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de B4GALNT4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral β-1,4-GalNAc-T4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción B4GALNT4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de β-1,4-GalNAc-T4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo B4GALNT4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.