Partículas Lentivirales de Activación (h) β-1,4-GalNAc-T3: sc-415306-LAC

B4GALNT3 codifica β-1,4-GalNAc-T3, una glicosiltransferasa residente del aparato de Golgi que transfiere N-acetilgalactosamina en un enlace β1,4 para generar motivos específicos de glicanos terminales tipo LacdiNAc en glicoproteínas y glicolípidos. Al moldear el ramificado de los glicanos y sus estructuras terminales, β-1,4-GalNAc-T3 influye en la estabilidad de las proteínas, las interacciones receptor–ligando y la adhesión célula–célula dentro de la vía secretora y de redes más amplias de glicosilación. La expresión alterada de B4GALNT3 se ha asociado con firmas de glicosilación desreguladas observadas en biología del cáncer y en contextos inflamatorios, donde los cambios en los glicanos de superficie pueden modular la señalización y el reconocimiento inmunitario. Por lo tanto, este gen es relevante para estudiar la regulación dependiente del “código glicano” del tráfico de membrana, las interacciones con la matriz extracelular y la actividad de receptores específica de determinadas vías.

Las partículas de activación lentiviral β-1,4-GalNAc-T3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de B4GALNT3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral β-1,4-GalNAc-T3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción B4GALNT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de β-1,4-GalNAc-T3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo B4GALNT3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.