β-1,4-Gal-T4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407251

Descripción general

B4GALT4 codifica la β-1,4-Gal-T4, una β-1,4-galactosiltransferasa residente del aparato de Golgi que transfiere galactosa a N-acetilglucosamina para construir unidades de lactosamina de tipo II en glicanos N- y O-ligados y en glicolípidos. A través de su contribución a la glicosilación, la β-1,4-Gal-T4 influye en el plegamiento proteico, el tráfico intracelular, el tiempo de permanencia de receptores y las interacciones célula–célula o célula–matriz mediadas por proteínas de unión a glicanos. La galactosilación alterada y la extensión de lactosamina pueden remodelar las redes de señalización y el reconocimiento inmunitario, vinculando la remodelación de glicanos dependiente de B4GALT4 con procesos relevantes para la enfermedad, como la inflamación y el comportamiento de las células tumorales. Como parte de la red más amplia de glicosiltransferasas, B4GALT4 ayuda a definir la composición del glicoma de la superficie celular, lo que afecta a programas de adhesión, migración y diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β-1,4-Gal-T4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen B4GALT4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del B4GALT4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de B4GALT4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β-1,4-Gal-T4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en B4GALT4 para la investigación de la señalización de β-1,4-Gal-T4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de B4GALT4 críticos para la función de β-1,4-Gal-T4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de B4GALT4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus B4GALT4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β-1,4-Gal-T4 (h) y el plásmido HDR β-1,4-Gal-T4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología B4GALT4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana B4GALT4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.