α-tectorin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423331

Descripción general

Tecta codifica la α-tectorina, una importante glucoproteína no colágena de la membrana tectorial del oído interno que contribuye a la organización de la matriz extracelular, al acoplamiento biomecánico y a una mecanotransducción meccanoeléctrica eficiente en las células ciliadas cocleares. Al moldear las propiedades viscoelásticas y la microarquitectura de la membrana tectorial, la α-tectorina favorece la sintonización de frecuencias y la sensibilidad al sonido. Las alteraciones de Tecta se asocian a fenotipos de disfunción auditiva, lo que la convierte en una diana útil para investigar el desarrollo del epitelio sensorial y la señalización dependiente de la matriz que gobierna la estimulación de las células ciliadas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α-tectorin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tecta en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tecta junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tecta tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α-tectorin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tecta para la investigación de la señalización de α-tectorin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tecta críticos para la función de α-tectorin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tecta para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α-tectorin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido α-tectorin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tecta. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α-tectorin (m) y el plásmido HDR α-tectorin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tecta para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tecta definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.