α-tectorin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405876
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- α-tectorin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico α-tectorin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: α-tectorin Anticuerpo (2A5): sc-517128
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
α-tectorin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405876 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TECTA codifica la α-tectorina, una glicoproteína mayoritaria no colágena de la membrana tectorial del oído interno que ayuda a organizar la arquitectura de la matriz extracelular necesaria para el acoplamiento mecanoeléctrico en las células ciliadas cocleares. La α-tectorina contribuye a la rigidez de la membrana y a la micromecánica que sustentan la deflexión de los estereocilios y la selectividad de frecuencias, vinculando los procesos de ensamblaje de la matriz extracelular y de proteostasis con la transducción de señales auditivas. Las variantes en TECTA se asocian con fenotipos de hipoacusia hereditaria, lo que la convierte en una diana relevante para estudiar las relaciones genotipo–estructura–función en las matrices extracelulares cocleares. La pérdida de función de la α-tectorina se investiga con frecuencia en modelos de desarrollo de la membrana tectorial, biomecánica de las células ciliadas y fisiología de la vía auditiva.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO α-tectorin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TECTA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TECTA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TECTA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α-tectorin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TECTA para la investigación de la señalización de α-tectorin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TECTA críticos para la función de α-tectorin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TECTA para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido α-tectorin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido α-tectorin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TECTA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α-tectorin (h) y el plásmido HDR α-tectorin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TECTA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TECTA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.