Plásmido CRISPR de Activación (m) α_2A-AR: sc-419023-ACT

Adra2a codifica el receptor adrenérgico alfa2A (alpha2A-AR) de ratón, un receptor acoplado a Gi/o que media señales inhibitorias en respuesta a la norepinefrina y la epinefrina. La activación del receptor suprime la actividad de la adenilil ciclasa para reducir la señalización de cAMP/PKA, modula la conductancia de canales iónicos e influye en vías posteriores de MAPK y fosfolipasa que modelan la transmisión sináptica y la excitabilidad celular. En los sistemas nerviosos central y periférico, el alpha2A-AR regula la liberación de neurotransmisores y el tono autonómico, con funciones adicionales en la regulación vascular y metabólica. La señalización adrenérgica desregulada que involucra a ADRA2A se ha vinculado a fenotipos neuropsiquiátricos, circuitos de respuesta al estrés, el procesamiento del dolor y rasgos cardiometabólicos, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de vías.

α2A-AR El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Adra2a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α2A-AR El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Adra2a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Adra2a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α2A-AR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Adra2a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α2A-AR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α2A-AR en células tumorales con expresión de Adra2a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.