α_1D-AR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419022

Descripción general

Adra1d codifica el receptor adrenérgico α1D de ratón (α1D-AR), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa C, la producción de fosfatos de inositol, la movilización de Ca2+ intracelular y la activación de PKC. A través de estas vías, el α1D-AR influye en la contracción del músculo liso, el tono vascular y del tracto urinario, y una regulación autonómica más amplia, con efectos posteriores sobre la señalización MAPK/ERK y los programas de transcripción. La expresión de Adra1d y la dinámica de su señalización se analizan con frecuencia en el contexto de la respuesta adrenérgica específica de cada tejido y de la contribución de los subtipos de receptores al mantenimiento de la homeostasis fisiológica. La señalización desregulada de GPCR adrenérgicos se ha relacionado con fenotipos cardiometabólicos y neuroconductuales en modelos preclínicos, lo que convierte a Adra1d en una diana relevante para estudios mecanísticos de vías sensibles al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α1D-AR (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adra1d en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adra1d junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adra1d tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α1D-AR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adra1d para la investigación de la señalización de α1D-AR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adra1d críticos para la función de α1D-AR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adra1d para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α1D-AR CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido α1D-AR CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adra1d. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α1D-AR (m) y el plásmido HDR α1D-AR (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adra1d para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adra1d definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.