α_1B-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419020

概要

Adra1b はマウスの α1B アドレナリン受容体（α1B-AR）をコードしており、これは G タンパク質共役型受容体（GPCR）です。α1B-AR は主に Gq/11 と共役してホスホリパーゼ Cβ（PLCβ）シグナルを活性化し、IP3 介在性の Ca2+ 放出の増加と、ジアシルグリセロール依存的な PKC 活性化を引き起こします。これらの経路を通じて、α1B-AR は平滑筋緊張、神経伝達、細胞興奮性を調節し、さらに遺伝子発現や適応応答に影響する下流の MAPK/ERK プログラムにも関与し得ます。神経系および心血管系の文脈では、アドレナリン受容体シグナルはストレス応答回路や自律神経調節と交差しており、Adra1b は高血圧、神経精神医学的形質、疾患モデルにおけるアドレナリン作動性調節異常に関連する表現型と結び付けられています。α1B-AR の機能を解析することは、GPCR シグナルのバイアス、受容体間クロストーク、Ca2+ 依存的な転写制御の機序研究に役立ちます。

α1B-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdra1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adra1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adra1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α1B-ARタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α1B-ARシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adra1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α1B-ARの機能に不可欠なAdra1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adra1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α1B-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびα1B-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adra1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α1B-AR HDRプラスミド（m）および α1B-AR HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdra1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdra1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。