α_1A-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401726

概要

ADRA1Aはヒトのα1Aアドレナリン受容体（α1A-AR）をコードしており、Gタンパク質共役受容体（GPCR）の一種として、主にGq/11と共役してホスホリパーゼCを活性化し、細胞内Ca2+濃度を上昇させ、PKC依存性シグナル伝達を促進します。α1A-ARは平滑筋収縮、血管緊張、神経伝達を調節し、細胞増殖や転写プログラムに影響する下流のMAPK/ERK経路も作動させ得ます。受容体活性は、心血管系および泌尿生殖器系の生理におけるアドレナリン作動性制御に寄与し、複数組織におけるストレス応答性シグナルネットワークも調節します。アドレナリン作動性シグナルの破綻やADRA1A発現の変化は、高血圧、下部尿路機能、腫瘍微小環境におけるシグナル伝達などの文脈で研究されており、経路に焦点を当てた研究の機序的な足がかりを提供します。

α1A-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるADRA1A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ADRA1A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ADRA1Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α1A-ARタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α1A-ARシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ADRA1A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α1A-ARの機能に不可欠なADRA1Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ADRA1Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α1A-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびα1A-AR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ADRA1A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α1A-AR HDRプラスミド（h）および α1A-AR HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはADRA1Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のADRA1A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。